CRISPR/Cas系統(tǒng)來源于細菌的免疫系統(tǒng)，在原核生物中，CRISPR-Cas系統(tǒng)作為免疫系統(tǒng)，利用CRISPR RNAs（crRNAs）作為引導分子，靶向識別入侵核酸，在抵御外來病毒入侵。

　　1、適應階段：將外來的病毒或噬菌體的DNA片段作為間隔序列（spacer）整合到CRISPR array；

　　3、干擾階段：成熟的crRNA與Cas蛋白形成核糖白復合體，crRNA引導Cas蛋白特異性靶向切割入侵者的核酸，達到免疫防御的目的。

　　知道了CRISPR/Cas的來源及在細菌免疫系統(tǒng)中發(fā)揮的作用，人們開始將此免疫系統(tǒng)應用在基因編輯上，那么我們再一起看一下CRISPR/Cas系統(tǒng)是如何應用到CRISPR檢測的呢？

　　CRISPR檢測技術所用的Cas蛋白主要有Cas12、Cas13和Cas14，與Cas9不同的是，Cas12、Cas13和Cas14除了具有特異性切割靶序列的功能外，在切割靶標序列之后，還具有非特異性切割其它核酸序列的功能（即Cas蛋白的反式切割活性）。在反式切割激活的狀態(tài)下，可非特異性切割任意單鏈，將體系中的熒光標記探針切碎，即可用來檢測信號。由此開展各種基因檢測技術。

　　Cas12a處理其自身的crRNA5’端，dsDNA靶標識別始于WED和PI結構域的PAM識別，從而促進dsDNA靶標的展開。r-環(huán)的形成是由TS結合crRNA片段而啟動的。過程的kaiyun官方開云crRNA-TS配對，同時TS-NTS展開導致形成完整的r-環(huán)。crRNA-TS DNA氫化誘導REC葉的構象變化，導致RuvC結構域的催化位點的變構解封。NTS結合槽引導移位的NTS向RuvC催化位點移動，導致NTS的順式裂解。隨后，進一步解開pam-遠端TS-NTS雙鏈，使TS進入RuvC催化位點，導致TS的順式裂解。pam-遠端dsDNA被釋放，而PAM-近端dsDNA仍然與Cas12a-crRNA復合物結合。這使得Cas12a保持在一個催化激活的構象中，這允許非靶標ssDNA的反式裂解。主要概括為以下四個步驟：

　　1、Cas12a蛋白的WED和PI結構域識別dsDNA靶標的PAM序列，從而促進dsDNA靶標的展開。

　　3、REC遠離RuvC，RuvC結構域切割位點暴露，順式切割非靶標鏈和靶標鏈。

　　一句話概括來說CRISPR檢測就是由靶標核酸激活Cas蛋白的反式切割活性，將體系中的熒光標記探針切碎，發(fā)出熒光信號，完成靶標核酸檢測的過程。

　　我們是專注于做CRISPR檢測的團隊，自主研發(fā)的Cas12a蛋白，Cas12b蛋白，Cas13a蛋白活性遠高于市面上其它公司，如果你也在正好在做CRISPR檢測，歡迎咨詢：（微信同號）。

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